亚洲av日韩av无码,你日的我走不了路了,国产高潮国产高潮久久久,女人国产香蕉久久精品

您好,歡迎進(jìn)入上海莼試生物技術(shù)有限公司網(wǎng)站!
全國(guó)服務(wù)熱線:13585831301
上海莼試生物技術(shù)有限公司
您現(xiàn)在的位置:首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 淺析熒光素酶檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟

淺析熒光素酶檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟

瀏覽次數(shù):883發(fā)布日期:2022-06-23
  熒光素酶檢測(cè)試劑盒是生物體內(nèi)催化熒光素或者脂肪醛氧化發(fā)光的一類酶的總稱,可以從細(xì)菌、螢火蟲、海星等生物中提取出來(lái)。熒光素酶的這種催化底物產(chǎn)生自發(fā)熒光的特性可以靈敏地檢測(cè)基因的表達(dá)。
 
  可分別催化各自的底物發(fā)出不同顏色的熒光,且兩種光吸收波長(zhǎng)不同,檢測(cè)互不干擾,因此可在同一個(gè)化學(xué)反應(yīng)體系中同時(shí)使用,作為雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)使用,已成為研究轉(zhuǎn)錄因子參與基因調(diào)控的有效手段,通過(guò)對(duì)啟動(dòng)子DNA片段的分析,驗(yàn)證啟動(dòng)子結(jié)合元件的反式激活能力,探討轉(zhuǎn)錄因子在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的分子機(jī)制。
 
  熒光素酶檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟:
 ?。?)用生物信息學(xué)方法分析并預(yù)測(cè)啟動(dòng)子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)(若目標(biāo)是檢測(cè)miRNA及其靶基因的靶向作用,則需要預(yù)測(cè)兩者結(jié)合位點(diǎn))。
  (2)設(shè)計(jì)引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動(dòng)子片段,將此片段插入到熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒(如pGL3-basic)中。
 ?。?)篩選陽(yáng)性克隆,測(cè)序。擴(kuò)增克隆并提純質(zhì)粒備用。
 ?。?)擴(kuò)增轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒,提純備用。同時(shí)準(zhǔn)備相應(yīng)的空載質(zhì)粒對(duì)照,提純備用。
 ?。?)培養(yǎng)293(或其它目的細(xì)胞),并接種于24孔板中,生長(zhǎng)10-24小時(shí)。
 ?。?)將報(bào)告基因質(zhì)粒與轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞。
 ?。?)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染48h后,棄去培養(yǎng)基,用100μl1XPBS洗1遍。
  (8)傾斜96孔板,吸干剩余的PBS。
 ?。?)去離子水將5XPLB稀釋成1XPLB,使用前放到常溫。
  (10)每孔加50μl稀釋好的1XPLB,搖床常溫條件下?lián)u15min,進(jìn)行裂解。
  (11)白色不透光的96孔酶標(biāo)板中每孔加步驟(10)的上清液10μl,加入100μl預(yù)先混好的LARII,2s后測(cè)數(shù)據(jù)。
  (12)每孔添加100μl預(yù)先混好的Stop&GloReagent,靜止2s后,測(cè)數(shù)據(jù)。
Contact Us
  • 聯(lián)系QQ:3004972506
  • 聯(lián)系郵箱:sdfskdfhs3004972506@qq.com
  • 傳真:86-021-60443211
  • 聯(lián)系地址:上海嘉定區(qū)嘉羅公路1661

掃一掃  微信咨詢

©2024 上海莼試生物技術(shù)有限公司 版權(quán)所有  備案號(hào):滬ICP備17029297號(hào)-3  技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)    GoogleSitemap    總訪問(wèn)量:105676 管理登陸

国产综合久久久久| 两个人免费视频高清播放| 被十几个男人扒开腿猛戳| 精品人妻一区二区三区四区在线| 欧美男男gaygay巨大粗长肥| 婷婷大伊香蕉五月天视频| 亚洲AV永久无码老湿机| 美女直播全婐app免费| 一起碰一起噜一起| 国产亚洲精品VA片在线播放| 精品国产一区二区三区av片| 无码熟妇av人妻又粗又大| 成年轻人电影免费20岁| 名门嫡姝-213大h慎入| 51精产一二三产区区别| 最新精品国偷自产在线69| 狠狠色综合网站久久久久久久| 宿主每日被guan满的日常| 久久久婷婷综合五月色麻豆| 成熟闷骚女邻居引诱2| 欧美激情肉欲高潮视频| 国语自产精品视频在线区| 国产在线 | 中文| 亚洲尺码与欧洲尺码区别入口跳转| 久久久久久久综合色一本| 无码熟熟妇丰满人妻啪啪软件| 免费无码av片在线观看软件| 间谍过家家第二季在线观看免费| 胡桃大战史莱姆视频链接免费 | 人妻无码中文专区久久五月婷| 高撅红肿h羞耻罚老师受学生攻| 成人毛片一区二区| 阿凡达在线观看| 色婷婷av国产精品欧美毛片| 国产成人无码一二三区视频| 高洁在公车被灌满jing液| 国产又色又爽又黄又免费| 偷窥 间谍 隐 tube| 亚洲av人人澡人人爽人人夜夜| 无码中文字幕一区二区三区| 欧美高清vivoes69|